小RNA干扰沉默VEGF基因对结肠癌HT29细胞系增殖和凋亡的影响
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【摘 要】目的探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelialgrowthfactor,VEGF)基因在调控人大肠癌(colorectalcarcinoma,CRC)细胞HT29增殖及凋亡中的作用。方法以脂质体Lip2000为载体,用针对VEGF特异靶点的siRNA转染人CRC细胞HT29后,应用免疫细胞化学sP法和Westernblot法检测VEGF蛋白表达变化;MTr法检测细胞增殖;流式细胞技术检测细胞凋亡。结果免疫细胞化学示:VEGF在正常组、脂质体组及阴性错配组细胞质中均呈强阳性;在VEGF-siRNA组细胞质呈弱阳性。Westernblot结果示:VEGF.siRNA组细胞的蛋白条带亮度明显低于正常组、脂质体组和阴性错配组;MTF检测结果发现,与阴性错配组相比,VEGF.siRNA组细胞生长出现明显抑制(P〈0.05),且不同时段(24、48、72h)肿瘤细胞增殖抑制率之间差异有显著性(P〈0.05);流式细胞术检测VEGF-siRNA组细胞凋亡比例明显高于正常组及阴性错配组(P〈0.05)。结论VEGF基因参与调控制CRC细胞HT29的增殖和凋亡,VEGF有望成为CRC基因治疗的新靶点。
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